Anticorpi secondari
Avrete sentito parlare molto di anticorpi secondari, i coniugati di anticorpi secondari sono strumenti importanti negli studi biochimici e cellulari. Gli anticorpi marcati con un enzima, come i secondari HRP, hanno un alto tasso di rotazione catalitica e sono usati abitualmente in vari saggi grazie alla loro rapida e robusta generazione di segnali. Gli anticorpi secondari HRP sono stati ampiamente utilizzati nei saggi immunosorbenti legati all’enzima (ELISA), nei saggi a flusso laterale (LFA), nell’immunoistochimica (IHC) e nel Western blotting per la diagnosi delle malattie infettive. Gli anticorpi coniugati con coloranti fluorescenti forniscono segnali più brillanti e capacità di multiplexing in applicazioni di analisi cellulare e proteica, compresa la microscopia a immunofluorescenza e l’imaging cellulare.
Le caratteristiche più importanti degli anticorpi secondari marcati con enzimi e coloranti sono l’alta sensibilità e l’amplificazione del segnale.
Gli anticorpi secondari si legano agli anticorpi primari e sono spesso utilizzati per rilevare e visualizzare un anticorpo primario, che è legato alla sua proteina di interesse, in applicazioni come l’immunoblotting o l’immunocitochimica.
Diversi anticorpi possono legarsi allo stesso anticorpo primario, aumentando la sensibilità e amplificando il segnale. Gli anticorpi sono spesso coniugati a molecole indicatrici, enzimi come HRP o fluorofori come APC, per permettere la rilevazione fluorescente, colorimetrica o chemiluminescente degli anticorpi primari.
La specie dell’anticorpo secondario dipende dalla specie ospite dell’anticorpo primario utilizzato. Gli anticorpi sono sviluppati contro una classe o sottoclasse di immunoglobuline di una specie specifica.
Un anticorpo secondario si lega a un anticorpo primario che si lega direttamente all’antigene bersaglio. Dopo che la regione V di un anticorpo primario si lega all’antigene, un anticorpo secondario marcato lega la sua regione V alla regione madre o C dell’anticorpo primario.
Sfruttando questa azione reciproca, gli anticorpi possono aiutare indirettamente a rilevare e purificare le proteine bersaglio (antigeni).
Gli anticorpi secondari sono più sensibili e flessibili nell’etichettatura e nella rilevazione e sono quindi utilizzati nella rilevazione colorimetrica, chemiluminescente e fluorescente degli anticorpi primari in una serie di applicazioni, come la citometria a flusso, il western blotting e l’imaging cellulare.
La selezione del tipo di anticorpo secondario si basa sulla classe dell’anticorpo primario – immunoglobulina IgG o IgM – sul tipo preferito di etichetta scritta e sull’ospite di origine.
Anche se la maggior parte degli anticorpi primari sono sviluppati utilizzando alcune specie dell’ospite di origine e la maggior parte degli anticorpi primari appartengono alla classe IgG, i produttori offrono spesso anticorpi secondari pronti all’uso che possono essere utilizzati in molte procedure e sistemi di rilevamento diversi.
Esempi di anticorpi di uso comune sono anti-rabbit IgG, anti-mouse IgG, anti-chicken IgG o anti-goat IgG.
L’anticorpo secondario selezionato deve sempre essere in grado di riconoscere la specie in cui l’anticorpo primario è stato prodotto, ad esempio per rilevare un anticorpo primario prodotto da un topo, un anti-topo del computer genitore viene utilizzato come anticorpo secondario.
L’anticorpo secondario ottimale per un saggio specifico dipende anche dal tipo di scrittura dell’etichetta.
QUALI SONO I MIGLIORI ANTICORPI SECONDARI?
La maggior parte degli anticorpi primari sono prodotti in ospiti di topo o coniglio; pertanto, le IgG anti-topo e le IgG anti-coniglio sono i tipi di anticorpi più popolari. La capra è la specie ospite più facilmente e frequentemente utilizzata dai produttori per produrre anticorpi secondari policlonali anti-mouse e anti-rabbit.
A COSA SERVONO GLI ANTICORPI SECONDARI?
Gli anticorpi secondari aiutano a rilevare, smistare e purificare gli antigeni target. Per consentire la rilevazione, questi devono avere specificità per la specie di anticorpo e l’isotipo dell’anticorpo primario utilizzato e sono solitamente coniugati.
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