Sistema di gene editing CRISPR / Cas9

Informazioni generali

Lo strumento sviluppato più recentemente nel campo delle endonucleasi RNA-guidate è costituito dal sistema Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) / Cas9 che permette di modificare ampi tratti di genoma tramite rottura e sostituzione, in modo specifico. Attraverso una sequenza target-specifica di RNA-guida a singolo filamento (sgRNA), la nucleasi Cas9 svolgerà il duplex di DNA genomico e cliverà la sequenza di entrambi i filamenti in seguito a riconoscimento. La conseguente rottura del doppio filamento viene richiusa attivando la ricucitura delle estremità non omologhe (NHEJ), distruggendo l’open reading frame del gene target.

Il Sistema CRISPR / Cas9 è superiore sia per efficacia che per efficienza ad altri strumenti di editing genomico, quali il Transcription Activator-Like Effector Nucleases (TALENs). La frequenza di ricombinazione omologa con il Sistema CRISPR / CAS9 è quattro volte maggiore rispetto a TALENs, e il targeting biallelico ha una efficienza con CRISPR / Cas9 tre volte maggiore.^[1]

In qualità di leader nell’ingegneria genetica e nella tecnologia dei vettori virali, ABM si impegna a produrre le tecnologie più avanzate ai prezzi più bassi. Loro hanno sviluppato un sistema lentivirale robusto e di facile utilizzo per l’espressione della libreria di sgRNA con ampiezza genomica per qualunque sequenza genica umana, murina o di ratto, così come sistemi di espressione di sgRNA in adenovirus non integrati, cosa che nessun altro produttore è stato capace di realizzare. Sono inoltre in grado di produrre vettori di espressione e virus per Cas9 Nuclease e Nickase, oltre a servizi personalizzati per la produzione di sgRNA specifici, inclusa la creazione di una Libreria personalizzata di Targeted Lentiviral sgRNA consistente un pool di sgRNAs per il knocking down di vie di segnalazione di geni o di famiglie di geni. Unico nel panorama offerto da ABM è il servizio personalizzato Generazione di linee cellulari con Knockout stabile, in cui prima si progetta il sgRNAs direzionandolo al target genico da voi desiderato e poi se realizza, specialmente per voi, il knockout nella vostra linea cellulare preferita.

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CRISPR / Cas9: Generazione di linee cellulari personalizzate con knockout stabile

Generazione di linee cellulari con Knockout stabile con CRISPR /Cas9

Linee cellulari personalizzate con knockout stabile, con il Sistema CRISPR

Il sistema Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) offre una tecnologia per il taglio a doppio filamento guidato da gRNA per l’editing genomico altamente specifico e personalizzabile. Utilizzando un RNA guida con sequenza specifica per il target, una nucleasi altamente specifica e programmabile e una nucleasi associata come CRISPR / Cas9, ABM offre un servizio efficiente di editing genomico con elevate selettività per la sequenza target. Il pacchetto con servizio di knockout genico personalizzato per linea cellulare comprende:

1. Design e costruzione del vettore
2. Assemblaggio del sgRNA e della nucleasi Cas9 per co-trasfezione/trasduzione nelle cellule target
3. Selezione e screening di cloni con knockout stabile (gene edited) attraverso western blot (costo dell’anticorpo non incluso nel servizio)
4. Espansione e crioconservazione delle linee cellulari modificate

Voi determinate il gene di interesse per il knockout e la linea cellulare che desiderate, il resto lo facciamo noi.

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CRISPR / Cas9: Libreria personalizzata di Targeted Lentiviral sgRNA

Realizzate il knockout di centinaia di geni target con un singolo pool lentivirale per sgRNA. Questo prodotto personalizzato può essere disegnato e realizzato per le vostre specifiche esigenze sperimentali ed è specialmente utile per il knockout di famiglie di geni e di vie di segnalazione. Vi forniremo l’insieme dei costrutti e 1-2 ml di >1 x 10⁷ IU/mL di lentivirus. Inviateci la vostra lista di geni (con la specie, il nome del gene e l’accession number) in un file di Microsoft Excel a [email protected] insieme al Vostro numero di conferma d’ordine.

 

 

Specie	Uomo, topo, ratto
Vettore	pLenti-U6-sgRNA
Selezione batterica	Ampicillina
Formato	Plasmide e virus
Aspetto	Liquido
Conservazione	-80°C o inferiore.
Validità	1 anno (a -80°C o inferiore).
Spedizione	Con ghiaccio secco.
Controllo di qualità	Digestione con enzimi di restrizione e sequenziamento
Precauzioni	Questo prodotto è solo a scopo di ricerca e non a scopo terapeutico o per applicazioni diagnostiche.