Il radioimmunodosaggio (RIA) è un tipo di test immunologico, o metodo radioimmunometrico, che si basa sulla formazione specifica di complessi antigene-anticorpo (Ag-Ac). che gli conferisce una grande specificità unita alla sensibilità dei metodi radiologici (isotopi radioattivi).

Il radioimmunodosaggio (RIA) consiste in una tecnica di laboratorio di analisi clinica. Utilizza isotopi radioattivi, è in vitro, cioè il sangue viene prelevato dal paziente e testato per le sostanze.

L’antigene bersaglio è marcato radioattivamente e si lega ai suoi anticorpi specifici (è necessario aggiungere una quantità limitata e nota dell’anticorpo specifico). Viene quindi aggiunto un campione, ad esempio siero di sangue, per avviare una reazione competitiva degli antigeni marcati nella preparazione e degli antigeni non marcati nel campione di siero con gli anticorpi specifici.

La competizione per gli anticorpi rilascerà una certa quantità di antigene marcato. Questa quantità è proporzionale al rapporto tra antigene marcato e non marcato. Si può quindi generare una curva di legame che permette di dedurre la quantità di antigene nel siero del paziente.

È una tecnica nata negli anni ’60 e ’70, che ha portato a un grande progresso in endocrinologia. È una tecnica molto sensibile, che misura piccole quantità di sangue.

Il radioimmunodosaggio (RIA) si basa sul principio di tutti i dosaggi immunologici, che è il riconoscimento di un antigene presente in un campione da parte di anticorpi diretti contro questo antigene.

Ciò significa che all’aumentare della concentrazione dell’antigene non marcato, più antigene non marcato si lega all’anticorpo, spostando la variante marcata. Gli antigeni legati vengono poi separati dagli antigeni non legati e viene misurata la radioattività degli antigeni liberi rimasti nel surnatante. Una curva di legame può essere generata usando uno standard noto, permettendo di ricavare la quantità di antigeni nel siero del paziente.

Il radioimmunodosaggio è una vecchia tecnica di dosaggio, ma è ancora ampiamente utilizzata e offre ancora chiari vantaggi in termini di semplicità e sensibilità.

• Antisiero specifico per l’antigene da misurare
• Disponibilità di una forma etichettata radioattiva dell’antigene
• Un metodo in cui il tracciante legato all’anticorpo può essere separato dal tracciante non legato
• Uno strumento per il conteggio della radioattività

Di solito vengono applicate etichette 125-I, sebbene siano stati utilizzati anche altri isotopi come C14 e H3. L’antigene radiomarcato ad alta attività (125-I) viene solitamente preparato mediante iodinazione dell’antigene puro al suo residuo di tirosina (o ai suoi residui) con metodi a base di cloramina-T o perossidasi e quindi separazione dell’antigene radiomarcato dall’isotopo libero mediante filtrazione su gel o HPLC. Altri componenti importanti del RIA sono l’anticorpo specifico dell’antigene e l’antigene puro da usare come standard o calibratore.

Le tecniche del doppio anticorpo, del carbone, della cellulosa, della cromatografia o della fase solida sono applicate per separare l’antigene legato e quello libero radiomarcato. La tecnica più comunemente usata è quella del doppio anticorpo combinato con il polietilene. La frazione legata o libera viene contata in un contatore gamma.

Allo stesso tempo, viene generata una curva di calibrazione o standard con campioni di concentrazioni note degli standard non marcati. La quantità di antigene in un campione sconosciuto può essere calcolata da questa curva.

La sensibilità può essere migliorata diminuendo la quantità di antigene e/o anticorpo radiomarcato. La sensibilità può anche essere migliorata con una cosiddetta incubazione non equilibrata. In questo caso, l’antigene radiomarcato viene aggiunto dopo l’incubazione iniziale di antigene e anticorpo.

L’anticorpo dovrebbe essere specifico per l’antigene in esame (altri antigeni non dovrebbero reagire in modo incrociato con l’anticorpo). Se si osserva una cross-reattività, si consiglia la selezione di un anticorpo diverso o la purificazione dell’anticorpo dall’antigene cross-reattivo mediante cromatografia di affinità.

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